medextour@gmail.com 38 (095) 216-02-08 Обратная связь

Выделение ДНК

Выделение ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) является важной частью лабораторных исследований по выявлению возбудителей заболеваний, определению принадлежности образцов биологических жидкостей тому или иному человеку и в целом ряде других случаев.

Диагностика ДНК

Незаменим этот этап и при осуществлении ПЦР-анализа, так как полимеразная цепная реакция предполагает обнаружение генетических фрагментов болезнетворных вирусов.

Процедура выполняется в лабораторных условиях с соблюдением строгих требований стерильности, так как даже в воздухе тщательно убранного помещения могут быть обнаружены частички пыли и неразличимых мельчайших биологических объектов (например, споры грибков), содержащих гены живых организмов.

Все инструменты и приспособления, применяемые для забора образца для анализа, а также при проведении последующих манипуляций, должны быть стерильными и по возможности одноразовыми. Соблюдение этого условия позволяет значительно повысить точность исследования и получить максимально достоверный результат.

Проведение процедуры ПЦР

Выделение геномной ДНК является самым первым этапом осуществления диагностического ПЦР-исследования. В результате специальной обработки химическими веществами происходит дальнейшее расщепление имеющейся двойной ДНК-спирали на тонкие отдельные нити.

Весь процесс обычно происходит следующим образом: вначале разрушают клеточные стенки путем механического перетирания исследуемого материала с оксидом кремния или алюминия. Указанное действие может быть выполнено в специальном лизис-буфере.

Затем осуществляется лизис мембран клеток с применением различных веществ, разрушающих структуру белка (протеиназы К для разрушения протеинов или РНКазы для разрушения РНК). В результате получается мультикомпонентный раствор, который содержит клеточные геномы.

Далее полученную смесь очищают путем проведения органической экстракции с использованием хлороформа и других веществ или выполняют дифференциальную сорбцию на специальном твердом носителе.

Выделение плазмидной ДНК основано на использовании щелочного метода, в процессе которого постепенно изменяют кислотность раствора в щелочную сторону. При этом плазмидные цепи остаются прочно связанными вместе, так как имеют обычно кольцевую форму. В ходе последующей ренатурации изменяют рН раствора до начального уровня, вследствие чего геномные цепи, которые ранее разошлись, слипаются в уплотненный комок, а плазмидные – восстанавливают первоначальную структуру и в результате их легко отделить от общей массы при центрифугировании

Геном и реакция ПЦР

Значение процедуры ПЦР

Выделение ДНК имеет большое значение для ПЦР-диагностики и является первым этапом данного вида исследования. Впоследствии выполняют амплификацию полученных фрагментов, в основу которой положен процесс достраивания молекул из имеющихся частиц. В завершение осуществляется детекция полученных продуктов, заключающаяся в добавлении в смесь некоторых растворов, которые «заставляют» светиться отдельные фрагменты различных вирусов.

Таким образом, выделение ДНК из крови или других жидкостей при проведении диагностического исследования необходимо:

  • для обнаружения возбудителей целого ряда заболеваний: вируса папилломы человека, цитомегаловируса, герпеса, хламидий и др.;
  • с целью установления причины бесплодия;
  • для установления «биологической чистоты» полученной донорской крови;
  • для диагностики внутриутробных инфекций плода;
  • при оценке эффективности лечения антибиотиками.

В качестве исходного материала для обнаружения генетических фрагментов может быть использован любой биологический материал: кровь, слюна, частицы кожи, моча, эпителий слизистых оболочек и др.

В дальнейшем спектр применения данной технологии будет расширяться: уже сейчас этот метод используют для обнаружения следов ГМО в продуктах питания, а также в криминалистике и других сферах.

19-09-2015
medextour.com
Похожие статьи по теме "Генетика и наследственность"
  • ДНК тест
    Тест на отцовство

    Некоторое время назад, про определение отцовства путём каких-либо анализов можно было разве что

  • Аутизм
    Лечение аутизма в Израиле

    Одной из наиболее актуальных проблем современной детской психиатрии является преодоление

  • Рентген мраморной болезни
    Мраморная болезнь

    Среди наследственных заболеваний с неясными причинами развития известна достаточно редкая мраморная

  • Консультация специалиста за границей
    Синдром Марфана

    Наверное, редко кто сможет правильно ответить на вопрос, что объединяет скрипача Никколо Паганини,

Клиники по направлению "Генетика и наследственность"
Спасибо,

в ближайшее время с вами свяжется наш специалист.
Будьте здоровы!